سوبرال[۱۲۶] و همکارانش (۲۰۰۱)، خواص مکانیکی ، ممانعت نفوذ بخار آب و خواص حرارتی فیلم های خوراکی بر پایه ژلاتین را بررسی کردند. خواص دو نوع فیلم ژلاتینی یکی بر پایه ژلاتین پوست گاو و دیگری بر پایه ژلاتین خوک مطالعه شده است. این فیلم ها با ۱ گرم ژلاتین در ۱۰۰ میلی لیتر آب ، ۱۵-۶۵ g سوربیتول در g 100 ژلاتین و در PH خنثی تهیه شده اند. نمونه ها در ۵۸٪ رطوبت نسبی و ۲۲ درجه سانتیگراد به مدت ۴ روز پیش از آزمایش کردن مشروط شده اند. خواص مکانیکی با تست سوراخ کردن و نفوذپذیری بخار آب با روش اندازه گیری وزن در ۲۲ درجه سانتیگراد تعیین شده اند. سوربیتول اثر پلاستیک کنندگی قابل توجهی روی نیروی پانچ و نیز روی دفرماسیون سوراخ فیلم های PSG ( ژلاتین پوست خوک ) و BGH ( ژلاتین پوست گاو) نشان می دهد. منشاء دو نمونه ژلاتین به نظر نمیرسد تأثیری در اثر پلاستیک کننده روی نیروی پانچ داشته باشد. WVP فیلم های ژلاتینی بطور خطی با غلظت سوربیتول افزایش یافت. منشاء ژلاتین روی مقادیر WVP اثر داشته است ، در بیش از g 25 سوربیتول در g100 ژلاتین فیلمهای BHGبیشتر از فیلم های PSG نسبت به بخار آب نفوذ پذیر هستند. تفکیک فازی بین ژلاتین و سوربیتول در فیلم های BHG و PSG مشاهده شده است. این پدیده با افزایش میزان سوربیتول افزایش یافت. به دلیل این واقعیت Tg ژلاتین بطور ملایمی با غلظت سوربیتول فیلم تغییر می کند. افزایش میزان سوربیتول تشکیل پیوند در فیلم را کاهش می دهد و به احتمال زیاد دلیل تفکیک فازی میباشد (سوبرال و همکارانش، ۲۰۰۱).
کوآنگ یئون لی[۱۲۷] و همکارانش (۲۰۰۴) خواص مکانیکی فیلمهای ترکیبی ژلاتین را مطالعه کرده اند. اشکال اصلی فیلم های بیوپلیمری ضعف خواص مکانیکی آنها می باشد. بنابراین مطالعات زیادی برای بهبود خواص مکانیکی فیلم های پلی ساکاریدی با ترکیب شدن مواد هیدروفوب و پلاستیک کننده ها صورت گرفته است. محققان فوق گزارش کردند که ترکیب شدن ژلان در ژل های ژلاتینی منجر به افزایش سینرژیستی قدرت شبکه ژلی و بهبود ثبات و استحکام ژل شده است. از فیلم های کامپوزیتی ساخته شده از ۲ بیو پلیمر متفاوت خواص مکانیکی بهتری می توان انتظار داشت. استحکام بافت های ژلان وابسته به نیروی یونی و pH و غلظت می باشد در حالیکه در ژل های ژلاتینی عمدتاً وابسته به غلظت ژلاتین می باشد. ژلان ژل های سخت و شکننده تشکیل می دهد در حالیکه ژلاتین ژل الاستیک و انعطاف پذیر و نرم تشکیل می دهد. در مجموع این دو ماده در نسبت های چشمگیر و غلظت های نمک سینرژیسم نشان می دهند. اثر نسبت ژلان/ژلاتین و غلظت NaCl روی خواص مکانیکی این فیلم ها بررسی شده است. TS (ماده جامد کل) تأثیر خیلی مهمی روی خاصیت مکانیکی فیلم دارد. TS فیلم های کامپوزیتی (ژلان/ژلاتین) به نسبت افزایش ژلاتین به طور خطی کاهش می یابد در حالیکه TE استحکام کششی با افزایش ژلاتین افزایش مییابد. در واقع ژلاتین جهت ایفای نقش پلاستیک کننده مناسب می باشد که انعطاف پذیری فیلم را افزایش داده و شکنندگی فیلم را نیز کاهش می دهد. وزن مولکولی نسبتاً پایین ژلاتین می تواند اجازه دهد که براحتی در شبکه های ژلان جای گرفته و موجب انعطاف بیشتر و کاهش سختی فیلم های کامپوزیتی گردد (کوآنگ یئون لی و همکاران، ۲۰۰۵).
(( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. ))
وانین[۱۲۸] و همکارانش (۲۰۰۵) خواص مکانیکی ، ممانعت نفوذ بخار آب و خواص حرارتی فیلم های خوراکی بر پایه ژلاتین را بررسی کردند. خواص دو نوع فیلم ژلاتینی یکی بر پایه ژلاتین پوست گاو و دیگری بر پایه ژلاتین خوک مطالعه شده است . این فیلم ها با ۱ گرم ژلاتین در ۱۰۰ میلی لیتر آب ، ۱۵-۶۵ g سوربیتول در g 100 ژلاتین و در PH خنثی تهیه شده اند. نمونه ها در ۵۸٪ رطوبت نسبی و ۲۲ درجه سانتیگراد به مدت ۴ روز پیش از آزمایش کردن مشروط شده اند. خواص مکانیکی با تست سوراخ کردن و نفوذپذیری بخار آب با روش اندازه گیری وزن در ۲۲ درجه سانتیگراد تعیین شده اند. سوربیتول اثر پلاستیک کنندگی قابل توجهی روی نیروی پانچ و نیز روی دفرماسیون سوراخ فیلم های PSG ( ژلاتین پوست خوک ) و BGH ( ژلاتین پوست گاو) نشان می دهد. منشاء دو نمونه ژلاتین به نظر نمیرسد تأثیری در اثر پلاستیک کننده روی نیروی پانچ داشته باشد . WVP فیلم های ژلاتینی بطور خطی با غلظت سوربیتول افزایش یافت. منشاء ژلاتین روی مقادیر WVP اثر داشته است ، در بیش از g 25 سوربیتول در g100 ژلاتین فیلم های BHG بیشتر از فیلم های PSG نسبت به بخار آب نفوذپذیر هستند. تفکیک فازی بین ژلاتین و سوربیتول در فیلم های BHG و PSG مشاهده شده است. این پدیده با افزایش میزان سوربیتول افزایش یافت. به دلیل این واقعیت Tg ژلاتین بطور ملایمی با غلظت سوربیتول فیلم تغییر می کند. افزایش میزان سوربیتول تشکیل پیوند در فیلم را کاهش می دهد و به احتمال زیاد دلیل تفکیک فازی می باشد (وانین و همکاران، ۲۰۰۵).
فاخوریا[۱۲۹] و همکاران (۲۰۱۲)، اثر دو عامل نرم کننده مختلف، گلیسرول و سوربیتول و غلظتهای متفاوت نشاسته و ژلاتین روی خواص مکانیکی و فیزیکی فیلم خوراکی ترکیبی بر پایه نشاسته اصلاح شده و ژلاتین بررسی شد. نتایج نشان داد شفافیت و مقاومت به استحکام کششی، با افزایش ضخامت افزایش پیدا کرد و همچنین نفوذپذیری نسبت به بخار آب، با افزایش مقدار ژلاتین در فرمولاسیون کاهش یافت. در نهایت، نتایج در ارتباط با استحکام کششی و ازدیاد طول در استراحت (EB) برای نمونه با نرم کننده سوربیتول بهتر از نمونه با نرم کننده گلیسرول بود (فاخوریا و همکاران، ۲۰۱۲).
۲-۱۴- جمع بندی
با توجه به موارد بیان شده هدف تهیه بسته بندی فعال خوراکی بر مبنای فیلم ترکیبی نشاسته ssps / ژلاتین و نانو دی اکسید تیتانیوم جهت کاربرد در بسته بندی مواد غذایی و داروها میباشد.
فصل سوم: مواد و روش ها
۳-۱- مواد
نشاستهی ssps ، ژلاتین گاوی از شرکت سیگما خریداری شد ( پنانگ مالزی[۱۳۰] ). نانو ذرات دی اکسید تیتانیوم، گلیسرول و سوربیتول مایع و نیترات منیزیم برای کنترل رطوبت نسبی از آلدریچ سیگما[۱۳۱] خریداری شد. محیط کشت مولر هینتون آگار[۱۳۲] و محیط کشت نوترینت براث[۱۳۳] (مرک آلمان)، هود میکروبی (Beasat)، انکوباتور شرکت پارس طب نوین، سویه های استاندارد میکروبی (۱۳۳۳۰ PTCC / ATCC 8739 ) اشرشیا کولی[۱۳۴] و (۱۱۱۲ PTCC / ATCC6538) استافیلو کوکوس آرئوس[۱۳۵]، از آزمایشگاه مرکزی سازمان پژوهشهای علمی و صنعتی، سایر مواد مورد استفاده از نوع آزمایشگاهی بوده است.
شکل ۳- ۱: تصویر ESEM نانو دی اکسید تیتانیوم
۳-۲- روش تهیه فیلمهای نانوبایوکامپوزیتی
محلول نانو ذرات دی اکسید تیتانیوم با غلظت ۱، ۲، ۳،و ۵% (وزنی/وزنی) پراکنده شدند و در ۶۰ درجه سانتیگراد با تکان دادن مداوم برای ۱ ساعت گرما داده شد و سپس برای ۲۴ ساعت بدون حرارت بر روی شیکر قرارداده شد تا محلول هموژن تولید شود. جهت اطمینان از همگن شدن محلولهای نانو به مدت یک ساعت محلولها در حمام اولتراسونیک یکنواخت شدند. نسبت۱۰ به ۱ از نشاسته ssps و ژلاتین و طبق روش کاستینگ و با اضافه کردن نسبت ۱به۳ از سوربیتول-گلیسرول۴۰% (w/w ازنشاسته) به عنوان پلاستیسایز، با هم ترکیب شدند. انتخاب این نرم کنندهها بر اساس پایداری بالاترین حرارت که در آزمایش پیشین از آن گرفته شد مبتنی بود (الماسی[۱۳۶] و همکاران، ۲۰۰۹). و به مدت ۱ ساعت بر روی هاتپلیت قرار داده شد. این دیسپرسیون نشاسته تا ℃۸۵ حرارت دادهشد و سپس برای کامل کردن ژلاتیناسیون به مدت ۴۵ دقیقه نگهداری شد. سپس محلول تا دمای ۳۵ درجه سانتی گراد سرد شد. مقدار ۹۰ گرم از دیسپرسیون در پلیتها ریخته شدند. این فیلمها در دمای محیط خشک شدند. فیلمهای خشک شده از سطح پلیتها جدا شدند و در ۲ ۲۳ درجه سانتی گراد و با رطوبت نسبی (RH) 5 50 درصد داخل دسیکاتور نگه داری شدند تا اینکه آزمایش شوند. تمام فیلمها (شامل کنترل) در سه مرتبه آماده شدند.
۳-۳ - ضخامت فیلم
ضخامت فیلم باریزسنج مدل insize با قدرت تفکیک۰۱ /۰ میلیمتر به طور تصادفی در ۵ موقعیت تعیین و میانگین آنها برای محاسبات استفاده شد.
۳-۴- آنالیز فیلم
آزمونهای صورت گرفته در این تحقیق شامل اندازگیری ویژگیهای مکانیکی، ویژگیهای فیزیکو شیمیایی و ممانعتی (نفوذ پذیری به بخار آب، اکسیژن، جذب آب، میزان جذب آب و حلالیت)، بررسی رنگ، خواص ضد میکروبی، بررسی میزان جذب اشعه UV، و بررسی ایزوترم جذب با تغییر غلظتهای مختلف نانو دی اکسید تیتانیوم بر فیلمهای ترکیبی نشاسته ssps / ژلاتین میباشد.
۳-۴-۱- ویژگی های مکانیکی
یک آزمون برای ارزیابی تغییر شکل (کششی) در سرعت ثابت در یک نمونه با ابعاد استاندارد برای اندازه گیری نیروی لازم برای پارگی مواد مورد استفاده قرار گرفت. منحنی نیرو در مقابل جابجایی این پارامترها را تعیین می کند.
تنش کششی (Tensil stress) (استحکام کششی نیز نامیده می شود) که در واحد MPa بیان می شود. نیروی لازم برای پارگی (گسیختگی) قسمتی از نمونه را اندازه گیری می کند.
بیشترین نیرویی که سبب گسیختگی جسم می شود تقسیم بر سطح مقطع نمونه، نشان دهنده قدرت کششی فیلم (مقاومت فیلم) است.
که در آن F نیرو بر حسب نیوتن و A مساحت قسمتی از فیلم که مورد آزمون قرار میگیرد (ضخامت × عرض در mm2)
کشیدگی Elongation (Strain هم نامیده می شود) که واحد آن درصد است. که این نسبت جابجایی به طول اولیه نمونه است:
بیشترین تغییر طول به طول اولیه، انعطافپذیری فیلم را بررسی می کند (چند درصد طولش می تواند کش بیاید ولی پاره نشود).
که در آن L جابجایی (mm) و L0 طول اولیه (mm) کشیدگی در نقطه شکست به صورت درصد نسبی است که مقیاسی از انعطافپذبری فیلمها است.
مدول یانگ (Yang’s Modulus) این پارامتر برابر است با شیب در ناحیه خطی منحنی تنش-کرنش (نسبت stress به strain) بیانگر میزان سختی فیلمها است.
ویژگیهای مکانیکی در هر شکست مشخص می شود. در هر شکستن تنش و کرنش برای هر نمونه محاسبه شد. قسمتی از آزمون که متفاوت باشد در طول اندازه گیری خیلی قابل توجه نیست. شکل منحنی تنش -کرنش رفتار خاص مواد شکننده (شکستن در محدوده الاستیک) یا انعطافپذیر (شکست در پلاستیک) را تعریف کند.
ویژگیهای مکانیکی درهرپارگی مشخص شدند. استرس واسترین پارکنندگی (σ، ε) برای هرنمونه محاسبه شد. بخش آزمایش به طورچشمگیری درطی اندازه گیری تفاوتی نکرد. میتوان برای تعریف کردن رفتارخاص ماده به عنوان ترد (شکست درمحدوده الاستیک ) یاductile (شکست درپلاستیک)، از شکل منحنیهای stress strainاستفاده کرد. D882-10ASTM باتغییری (اصلاحی) برای تعیین کردن ویژگیها مکانیکیدرشرایطاستانداردمورداستفادهقرارگرفت (ASTM, 2010). نوارهای فیلم به طول۱۰۰mm و عرض ۲۰mm بریده شدو به مدت ۴۸ ساعت در دمای℃ ۲۳ و رطوبت نسبی ۵۳ % تنظیم شد. آنالیز بافت مجهزشده بانرم افزارTexture Exponent 32 به منظور اندازه گیری ویژگیهای مکانیکی فیلم به کار گرفته شد. جداسازی سرعت اولیه و سرعت crosshead به ترتیب ۵۰mmو ۳۰ بود. Elongation و قدرت کشش در نقطه پاره شدن از تغییرشکل و نیروی داده ثبت شده توسط نرم افزارمحاسبه شد. ۸ تکرار هر نمونه مورد ارزیابی قرار گرفت.
۳-۴-۲- رنگ سنجی
رنگ سطح فیلم با بهره گرفتن از رنگسنجها مشخص شد (اسپکتروفتومتر مینولتا ۳۵۰۰ اوساکا- ژاپن) و مقادیرL*،a*، b* گزارش شد. قبل از آنالیز ابزار با اجسامی با عبور ۱۰۰% و ۰% کالیبر شد. آزمایشات در سه مرحله و با سیستم کامپیوتری و با بهره گرفتن از نرم افزار مجیک اسپکترا انجام گرفت (نسخه ۱۱/۲ شرکت سایبر کروم مینولتا ژاپن).
میزان رنگ در سه موقعیت تصادفی اندازه گیری شد که مرکز نمونهی فیلم را نیز شامل می شود. بیشترین مقدار برای ۱۰۰ و کمترین مقدار برای آن ۰ است. a* مثبت بعنوان قرمز و a*منفی بعنوان سبز مشخص شد در حالی که b* مثبت بعنوان زرد و b* منفی به عنوان آبی مشخص گردید.
۳-۴-۳- نفوذ پذیری بخار آب (WVP)
از روش اصلاح شده کاپ گراومتریک به روش استاندارد ملی آمریکا ASTM E96-05 که برای تعیین میزان نفوذ پذیری در فیلم ها استفاده شده است( ASTM ,2005b). در این آزمون کاپ ها با آب پر شدند و هوا حدود ۵/۱ سانتیمتر بین سطح فیلم و آب بود. فیلم ها به اندازه دهانه کاپ بریده شدند و به کمک خمیر بازی بر روی کاپ نگه داشته شدند. در ابتدا وزن اولیه کاپ ها با ترازو با دقت ۰۰۰۱/۰ اندازه گیری شد و سپس درون دسیکاتور که با سیلیکاژل(خشک کن) برای تولید رطوبت نسبی %۰ پر شده بود قرار گرفتند. پس از آن هر ۲ ساعت یک بار نمونه ها توزین شد تا ۷ نقطه این روند ادامه داشت. سپس از نمودار وزن بدست آمده در مقابل زمان برای تعیین (WVTR) استفاده شد. شیب قسمت خطی این نمودار نشان دهنده مقدار حالت پایدار از نفوذ بخار آب در میان فیلم در هر واحد زمان (g/h) (WVTR) بر اساس gr بر m2 در هر روز بیان شد. رگرسیون دامنه ضرایب %۹۹/۰ یا بالاتر بدست آمده. (WVP) فیلم توسط ضرب کردن (WVTR) در ضخامت متوسط فیلم و تقسیم آن بر فشار بخار آب در سطح فیلم محاسبه می شود.
۳-۴-۴- حلالیت فیلم ها
حلایت فیلمها در آب بر طبق نظر مایزورا[۱۳۷] و دیگران (۲۰۰۷ ) و با قدری تغییرات تعیین شد پس از تعیین میزان رطوبت موجود در هر فیلم میزان مواد جامد موجود در آن قابل تعیین بود با توجه به این مسأله، تکههای از فیلم (۶۰۰میلی گرم) بریده شده در یک دسیکاتور با ( (۰% RH کلرید کلسیم به مدت ۲۴ ساعت در دمای ۴۰ درجه سانتیگراد حرارت داده شد. سپس درون بشر با ۱۰۰ سیسی آب دیونیزه قرار داده شد این نمونهها با تکان خوردنهای دائمی به مدت۲۴ ساعت در دمای اتاق به همزده شدند. سپس مخلوط فیلم و آب بر روی یک کاغذ صافی که قبلا به وزن ثابت رسیده و دقیقا توزین شده بود صاف شد. کاغذ صافی به همراه نمونه تا رسیدن به وزن ثابت در دمای۴۰ درجه سانتیگراد قرار داده شد. درصد حلالیت فیلمها در آب از رابطه زیر محاسبه گردید.
۱۰۰= درصد حلالیت
۳-۴-۵- ظرفیت جذب آب (WAC)
برای بررسی میزان ظرفیت جذب آب تکه هایی از فیلم (۲×۲ cm) بریده و در دسیکاتور که زیر آن کلرید کلسیم (برای صفر شدن رطوبت) قرار داشت به مدت ۲ روز قرار داشت. نمونه ها با ترازویی با دقت ۰۰۰۱/۰ توزین گردید، درون دسیکاتوری که زیر آن آب قرار دارد، قرار داده می شود. و بعد از ۲۴ ساعت نمونهها توزین شدند، و از طریق فرمول زیر میزان جذب آب بدست آمد:
وزن خشک فیلم/وزن آب جذب شده =WAC
۳-۴-۶- ایزوترم جذب
ایزوترم جذب رطوبت در℃۲۵ براساس روشی که به وسیله برتوزی[۱۳۸] و همکاران در سال ۲۰۰۷، شرح داده شده است مشخص شد. موازنه آزمون جذب در ۳ تکرار برای هر رطوبت نسبی اندازگیری شد و به صورت گرم جذب آب برگرم فیلم خشک گزارش شد. داده های تجربی جذب در معادلهG.A.B جایگزین شد. معادلهG.A.B به وسیله فرمول زیر تعریف می شود:
که در آنWm , C , Kپارامترهای معادلهG.A.B هستند،Wمحتویرطوبت (برمبنای خشک) وaw فعالیت آبی است. برای ارزیابی دقتوصحت معادله G.A.B داده های تجربی برای ایزوترم جذب به صورت درصد متوسط ضریب انحراف نسبی(E) برای فیلمها محاسبه شد. توسط فرمول زیر داده می شود:
که در آن Nمقداردادههای تجربیmi, mip به ترتیب میزان آزمایشی پیش بینی شده بود (داده های تئوری).در مدل Eمیزان زیر%۱۰نشان دهنده جایگزینی مناسب است ( چیوارک[۱۳۹] و همکاران، ۲۰۰۹).
همچنین مدل ایزوترم جذب تعادلی چند جمله ای با مرتبه ۳ نیز در داده های تجربی براز گردید.
۳-۴-۷- اشعه مرئی - UV
اشعه ماوراء بنفش مرئی برای هر دو طیف جذب و عبور برای فیلم های نانوبایوکامپوزیت از ۱۹۰ تا ۱۱۰۰ نانومتر با بهره گرفتن از اسپکتوفتومتر مدل UV-1650PC ثبت شد، از صفحه شیشه ای خالی به عنوان مرجع استفاده شد.
۳-۴-۸- نفوذ پذیری به اکسیژن
اندازه گیری نفوذپذیری فیلمها به وسیله MoconOxtran 2/21 انجام شد و با بهره گرفتن از نرمافزار نفوذپذیری WinPermTM و با کمک روش استاندارد ASTM-D3985-05 نفوذ پذیری به اکسیژن به دست آمد. فیلمها در پوشش های فویل آلومینیوم با یک فضای باز cm25 قرار داده شدند و روی یک سل دیفوزیون قرار داده شدند. آزمون در دمای ۲۵، فشار اتمسفری و رطوبت نسبی %۵۰ (RH)، %۲۱ گاز اکسیژن به عنوان تست گاز انجام شد. اکسیژن منتقل شده از میان فیلمها با بهره گرفتن از حمل کننده گاز (N2/H2) به سنسورهای کالمتریک عبور داده می شود. حمل کننده خارجی هر ۱ ساعت ۱ بار برای رسیدن به حالت پایدار انتقال اکسیژن به صورت همگرا اندازه گیری شد.
ضریب نفوذپذیری cc-μm/(m2 day atm) بر اساس نرخ انتقال اکسیژن در حالت ثابت با در نظر گرفتن ضخامت فیلم محاسبه شد ( ASTM 2005a).
۳-۴-۹- آزمون میکروبی
بدین منظور سویه های استاندارد میکروبی (۱۳۳۳۰ PTCC / ATCC 8739 ) اشرشیا کولی[۱۴۰] و (۱۱۱۲ PTCC / ATCC6538) استافیلو کوکوس آرئوس[۱۴۱]، از آزمایشگاه مرکزی سازمان پژوهشهای علمی و صنعتی ایران به صورت لیوفیلیزه تهیه شد. آمپول حاوی میکروبها با احتیاط کامل در شرایط استریل و در زیر هود میکروبی شکسته شد. سپس مقدار ۵/۰ میلی لیتر محیط کشت استریل نوترینت براث[۱۴۲] توسط پیپت پاستور به داخل آمپول تخلیه، و با سر سوزن به هم زده شد، سپس سوسپانسیون میکروبی را در درون طرف حاوی محیط کشت استریل ریخته و به مدت ۲۴ ساعت در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد نگهداری شد و سپس در محیط کشت مولر هینتون آگار[۱۴۳] به روش خطی چهار منطقهای کشت داده شد و به مدت ۲۴ ساعت در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد گرمخانه گذاری شد.
آزمایش فعالیت ضد میکروبی بر روی فیلم با بهره گرفتن از روش نفوذ آگار[۱۴۴] بر اساس مایزورا[۱۴۵] و همکارانش (۲۰۰۷) صورت گرفت. تاثیرات ضد میکروبی بر روی فیلم با ممانعت صفر در مقابل E.coli و استافیلو کوکوس آرئوس[۱۴۶]، سویه های بیماریزا بر روی کشت جامد معین شدند. برای تعیین فعالیت ضد میکروبی فیلمهای خوراکی از روش نفوذ ماده ضد میکروبی در محیط آگار دار استفاده شد. فیلمهای تولید شده با بهره گرفتن از یک قالب به دیسکهایی به قطر ۵ میلی متر تبدیل شدند. سپس تک کلنی از باکتری برداشته و کشت ۴ منطقهای رو پلیت میدهیم تا باکتری فعال شود. پس از کشت آن را داخل انکوباتور ۳۷ درجه سانتی گراد به مدت ۲۴ ساعت گذاشته تا باکتری رشد کند، و در دمای ۴ درجه سانتی گراد نگهداری شد. به منظور حفظ قابلیت زیستی باکتری، هر بیست روز کشت مجدد آن انجام گرفته شد. سپس از باکتری فعال شده توسط لوپ تک کلنی برداشته و داخل لوله آزمایش حاوی ۵ سیسی آب مقطر استریل شده اضافه میکنیم تا کدورت سوسپانسیون میکروبها برابر کدورت نیممک فارلند گردد (استانداردهای نیم مک فارلند با افزودن حجم خاصی از محلول اسید سولفوریک ۱ درصد و کلرید باریم ۱۷۵/۱ درصد برای به دست آوردن یک محلول سولفات باریم با دانسیته نوری خاص تهیه می شود. معمولا استاندارد نیم مک فارلند که حاوی ۹۵/۹ میلی لیتر اسید سولفوریک ۱ درصد و ۰۵/۰ میلی لیتر کلرید باریم ۱۷۵/۱ درصد می باشد بیشتر کاربرد دارد. استاندارد نیم مک فارلند کدورتی معادل با یک سوسپانسیون باکتری حاوی cfu/ml 108 ۵/۱ ایجاد می کند)، سپس زیر هود میکروبی از این لوله آزمایش توسط سمپلر ۱۰۰۰ میکرو لیتر، ۱ سیسی از محلول را برداشته و سطح پلیت ریخته و توسط میلهL شکل کشت دادیم، سپس دیسکها در شرایط استریل (۱۰ دقیقه زیر اشعه uv قبل از کشت دادن) روی محیط مولر هینتون آگار[۱۴۷] قرار داده شدند. پلیتها سپس در دمای ۳۷ درجه سانتیگراد به مدت ۲۴ ساعت گرم خانه گذاری شدند. سپس قطر هالههای تشکیل شده با بهره گرفتن از کولیس با دقت ۰۲/۰ میلی متر اندازه گیری شد. اختلاف مساحت هالههای تشکیل شده از مساحت دیسکها به عنوان شاخص فعالیت ضد میکروبی در نظر گرفته شد. در مواردی که هاله تشکیل نشده بود یعنی فعالیت ضد میکروبی وجود نداشت، اختلاف مساحت برابر صفر در نظر گرفته شد.
۳-۵- تجزیه و تحلیل آماری
از آزمون های آنووا دو طرفه و توکی (یا دانکن) برای ویژگی های فیزیکی و مکانیکی، و پارامترهای مختلف در میان انواع مختلف فیلم در سطح معنی دار %۵ به کار برده شد. تجزیه و تحلیل با بهره گرفتن از گراف پد پریزم ۶، انجام شد. برای انجام مدل سازی از تکنیک کمینه کردن مجموع مربعات اختلاف داده های تئوری و عملی به کمک افزونه Solver در نرم افزار اکسل ۲۰۱۰ استفاده شد.
[یکشنبه 1400-09-28] [ 08:18:00 ب.ظ ]
|